Лабораторная диагностика гельминтозов


БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

РЕФЕРАТ

НА ТЕМУ:

«ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ»

МИНСК, 2009


Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид. с кодексов), личинок или яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь.

Исследование испражнений (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, связанных с ним протоками, поэтому их яйца или части тела выделяются с испражнениями.

При копрологическом анализе необходимо строго соблюдать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклянные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструментарий, содержать в чистоте рабочее место.

Испражнения исследуют макроскопически или микроскопически хотя обнаружения в них паразитических червей или их частей (гельминтоскопия), а главным образом — яиц гельминтов (гельминтоовоскопия).

Макроскопические методы


Осмотр испражнений.

При осмотре испражнений в них можно обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стробилы, проглоттиды, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекомендуется для выявления энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза.

Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стеклянной посуде или в спичечных коробках. На каждой коробке должна быть этикетка с указанием фамилии, имени, возраста и места жительства обследуемого.

Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или в чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой.

Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.

При методе отстаивания всю исследуемую порцию испражнений нужно размешать с водой и дать отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно слить верхний слой жидкости.

Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.

Микроскопические методы.

Микроскопия — основной метод исследования испражнений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз поставить затруднительно или невозможно в связи с разрушением яиц и личинок. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня.


Нативный мазок.

Небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка.

При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.

Толстый мазок с целлофаном (метод Като).

Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью.

Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мхм, нарезают пластинками с размером сторон 20×40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола.3-5 мл указанной смеси достаточно для обработки 100 пластинок, которые затем можно хранить в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде.

Ход исследования.

100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана.


Микроскопирование при малом или большом увеличении необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду — через 30-40 минут. Высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование.

Метод Като позволяет исследовать значительный объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид.

Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като недостаточно эффективен.

Метод закручивания по Шульману.2-3 г испражнений размешивают стеклянной палочкой круговыми движениями с трех-пятикратным количеством физиологического раствора, не касаясь стенок сосуда. Яйца и личинки гельминтов скапливаются в центре.

После окончания перемешивания каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом хорошо выявляются личинки гельминтов.

Методы обогащения.

Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого солевого раствора, что позволяет обнаруживать небольшое их количество. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом.


Этот метод осаждения (седиментации) применяют для яиц трематод. При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Это методы всплывания (флотации). Они наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.

Метод Фюллеборна основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18-1,22. Раствор хранят в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы.

Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.

Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность к недостаткам — необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.


Метод Калантарян.

Вместо насыщенного раствора поваренной соли используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают; литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения). Удельный вес раствора около 1,4.

Достоинства метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод, что следует учитывать при исследованиях с целью диагностики указанных гельминтозов. Высокая стоимость нитрата натрия ограничивает применение данного метода.

Метод Красильникова.

Под действием поверхностно-активных веществ, входящих а состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражнений и концентрируются в осадке.

Предварительно готовят 1% раствор стирального порошка «Лотос». Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100°С в течение 1-2 часов, затем 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии «Лотоса» можно использовать и другие стиральные порошки, но каждого из них нужно брать столько, сколько растворится без образования осадка в 1 л водопроводной воды.

В стеклянный сосуд, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и хорошо перемешивают.

Соотношение испражнений и раствора должно быть примерно 1: 20. Испражнения должны находиться в растворе не менее суток. За это время на дне образуется осадок из 2-3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато-серые хлопья.


Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2-3 капли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Метод Красильникова позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями.

Метод Горячева.

Метод Горячева (метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия.

Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра.

Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

Метод липкой ленты.

Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют.


Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.

Диагностика тканевых гельминтозов.

Для диагностики тканевых гельминтозов (трихинеллез, цистицеркоз и другие) применяются иммунологичекие методы исследования: реакция кольцепреципитапии, связывания комплемента, флюоресцирующих антител, преципитации в агаре и другие, с помощью которых обнаруживаются в сыворотке крови больных соответствующие антитела. Для диагностики трихинеллеза и филяриатозов применяются специальные методы исследований.

Метод биопсии мышц.

Метод биопсии мышц для диагностики трихинеллеза. Исследуют мышцы больного и остатки мяса животных, послуживших причиной заражения человека. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях.

Мышцу измельчают ножницами и помещают между двумя толстыми стеклами (компрессорий) слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах.

Метод переваривания мышц.

Метод переваривания мышц для диагностики трихинеллеза более эффективным. Мелко нарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37°С на 12-16 часов.


Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц с 15-20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и микроскопируют его. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл.

Метод мазка крови и толстой капли.

Данный метод применяется для диагностики фиряриатозов. Большинство видов микрофилярий локализованы в крови, поэтому для их обнаружения применяют исследование крови — мазок или толстую каплю.

Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают ее по стеклу.

Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают ее до получения пятна, диаметром около 1,5 см.

После высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому-Гимза. Михрофиллярии выявляются в виде тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.

Таблица 1

ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ


Литература


1.    Петровский А.В. Паразитология, Мн.: Светач, 2007 г. 354 с.

2.    Аскерко А.Ч. Основы паразитологии Мн.: БГМУ, 2008 г. 140 с.

3.    Селявка А.А. Общая паразитология Мн.: Знание, 2007 г. 250 с.

www.vevivi.ru

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

     Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид, сколексов), личинок или яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь.

     Исследование испражнений (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, связанных с ним протоками, поэтому их яйца или части тела выделяются с испражнениями.

     При копрологическом анализе необходимо строго соблюдать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклянные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструментарий, содержать в чистоте рабочее место.  

     Испражнения исследуют макроскопически или микроскопически для обнаружения в них паразитических червей или их частей (гельминтоскопия), а главным образом – яиц гельминтов (гельминтоовоскопия).

Макроскопические методы

     Осмотр испражнений. При осмотре испражнений в них можно обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стробилы, проглоттиды, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекомендуется для выявления энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза.

     Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стеклянной посуде или в спичечных коробках. На каждой коробке должна быть этикетка с указанием фамилии, имени, возраста и места жительства обследуемого.

     Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.

     При методе отстаивания всю исследуемую порцию испражнений нужно размешать с водой и дать отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно слить верхний слой жидкости. Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.  

Микроскопические методы

     Микроскопия – основной метод исследования испражнений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз поставить затруднительно или невозможно в связи с нарушением яиц и личинок. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1 – 3 дня.

     Нативный мазок. Небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина (и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка.

     При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.

     Толстый мазок с целлофаном (метод Като). Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и с подкрашенном малахитовой зеленью. Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мкм, нарезают пластинками с размером сторон 20×40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола, 3 – 5 мл указанной смеси достаточно для обработки 100 пластинок, которые затем можно хранить в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде.  

     Ход исследования. 100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана. Микроскопирование при малом или большом увеличении необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду – через 30 – 40 минут. Высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование.

     Метод Като позволяет исследовать значительный объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид. Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като недостаточно эффективен.

     Метод закручивания по Шульману. 2 – 3 г испражнений размешивают стеклянной палочкой круговыми движениями с трех‒пятикратным количеством физиологического раствора, не касаясь стенок сосуда. Яйца и личинки гельминтов скапливаются в центре. После окончания перемешивания каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом хорошо выявляются личинки гельминтов.

Методы обогащения

     Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого солевого раствора, что позволяет обнаруживать небольшое их количество. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом. Этот метод осаждения (седиментации) применяют для яиц трематод. При большом удельном весе раствора яиц трематод. При большем удельном весе раствора яиц всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Это методы всплывания (флотации). Они наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.

     Метод Фюллеборна основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18 – 1,22. Раствор хранят в закрытой бутылке.

     Для проведения анализа в банку объемом 30 – 50 мл помещают 2 – 3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы. Через 45 – 60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2 – 4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на два предметных стекла. Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

     К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность, к недостаткам – необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

     Метод Калантарян. Вместо насыщенного раствора поваренной соли используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают 1 литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения). Удельный вес раствора около 1,4.

     Достоинства метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод, что следует учитывать при исследованиях с целью диагностики указанных гельминтозов. Высокая стоимость нитрата натрия, ограничивает применение данного метода.

     Метод Красильникова. Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражнений и концентрируются в осадке.

     Предварительно готовят 1% раствор стирального порошка «Лотос». Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100ОС в течение 1 – 2 часов, затем 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии «Лотоса» можно использовать и другие стиральные порошки, но каждого из них нужно брать столько, сколько растворяется без образования осадка в 1 л водопроводной воды.

     В стеклянный сосуд, емкостью 30 – 50 мл, наливают 20 – 30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и хорошо перемешивают. Соотношение испражнений и раствора должно быть примерно 1 : 20. испражнения должны находиться в растворе не менее суток. За это время на дне образуется осадок из 2 – 3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато‒серые хлопья.

     Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2 – 3 капли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

     Метод Красильникова позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями.

     Метод Горячева (метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2 – 3 см наливают 70 – 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20 – 25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра. Через 2 – 3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12 – 20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

     Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4 – 5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют. Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.

Диагностика тканевых гельминтозов

     Для диагностики тканевых гельминтозов (трихинеллез, цистицеркоз и другие) применяются иммунологические методы исследования: реакция кольцепреципитации, связывания комплемента, флюоресцирующих антител, преципитации в агаре и другие, с помощью которых обнаруживаются в сыворотке крови больных соответствующие антитела. Для диагностики трихинеллеза и филяриатозов применяются специальные методы исследований.

     Метод биопсии мышц для диагностики трихинеллеза. Исследуют мышцы больного и остатки мяса животных, послуживших причиной заражения человека. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях. Мышцу измельчают ножницами и помещают между двумя толстыми стеклами (компрессорий) слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах.

     Метод переваривания мышц для диагностики трихинеллеза является более эффективным. Мелко нарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37ОС на 12 – 16 часов. Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц в 15 – 20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и микроскопируют его. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл.

     Метод мазка крови и толстой капли для диагностики филяриатозов. Большинство видов микрофилярий локализованы в крови, поэтому для их обнаружения применяют исследовании крови – мазок или толстую каплю. Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают ее по стеклу. Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому‒Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают ее до получения пятна, диаметром около 1,5 см. после высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому‒Гимза. Микрофиллярии выявляются в виде тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.

 

   

nsportal.ru

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

  1. Исследование испражнений

Копрологические исследования (исследования кала) в диагностике гельминтозов имеют большое значение, так как многие гельминты паразитируют в кишечнике или органах с ним связанных, а яйца их выделяются с испражнениями.

Испражнения исследуются двумя методами:

1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.

При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.

2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.

Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.

1. Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.

2. Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO3 (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.

3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.

4. Метод закручивания по Шульманудля обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.

5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.

6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 280С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 600. Лаборант должен работать в перчатках.

7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.

а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.

б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)

Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.

в) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.

Исследование крови, желчи, мокроты и мышц

  1. Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.

  2. Исследование дуоденального содержимого и желчи. Яйца и личинки гельминтов паразитирующих в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе (описторхоз, фасциолез, дикроцелилз) и двенадцатиперстной кишке (стронгилоидоз).

  3. Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.

  4. Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.

Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.

Серологические методы

Серологические методы исследования (выявление антител в сыворотке крови) используются для диагностики трихинеллеза, эхинококкоза, альвеококкоза, цистицеркоза и ряда других гельминтов. Эти методы особо ценны, когда наличие паразита в организме другими более доступными путями доказать не удается. Следует учитывать, что серологические реакции не являются абсолютным показателем наличия или отсутствия паразита, что обусловлено и состоянием иммунитета и спецификой той или иной реакции.

2

studfiles.net

реферат по дисциплине Медицина на тему: Лабораторная диагностика гельминтозов; понятие и виды, классификация и структура, 2016-2017, 2018 год.

2

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

РЕФЕРАТ

НА ТЕМУ:

«ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ«

МИНСК, 2009

Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид. с кодексов), личинок или яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь.

Исследование испражнений (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, связанных с ним протоками, поэтому их яйца или части тела выделяются с испражнениями.

При копрологическом анализе необходимо строго соблюдать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклянные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструментарий, содержать в чистоте рабочее место.

Испражнения исследуют макроскопически или микроскопически хотя обнаружения в них паразитических червей или их частей (гельминтоскопия), а главным образом — яиц гельминтов (гельминтоовоскопия).

Макроскопические методы

Осмотр испражнений.

При осмотре испражнений в них можно обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стробилы, проглоттиды, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекомендуется для выявления энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза.

Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стеклянной посуде или в спичечных коробках. На каждой коробке должна быть этикетка с указанием фамилии, имени, возраста и места жительства обследуемого.

Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или в чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой.

Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.

При методе отстаивания всю исследуемую порцию испражнений нужно размешать с водой и дать отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно слить верхний слой жидкости.

Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.

Микроскопические методы.

Микроскопия — основной метод исследования испражнений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз поставить затруднительно или невозможно в связи с разрушением яиц и личинок. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня.

Нативный мазок.

Небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка.

При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.

Толстый мазок с целлофаном (метод Като).

Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью.

Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мхм, нарезают пластинками с размером сторон 20×40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола.3-5 мл указанной смеси достаточно для обработки 100 пластинок, которые затем можно хранить в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде.

Ход исследования.

100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана.

Микроскопирование при малом или большом увеличении необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду — через 30-40 минут. Высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование.

Метод Като позволяет исследовать значительный объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид.

При этом для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като недостаточно эффективен.

Метод закручивания по Шульману.2-3 г испражнений размешивают стеклянной палочкой круговыми движениями с трех-пятикратным количеством физиологического раствора, не касаясь стенок сосуда. Яйца и личинки гельминтов скапливаются в центре.

После окончания перемешивания каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом хорошо выявляются личинки гельминтов.

Методы обогащения.

Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого солевого раствора, что позволяет обнаруживать небольшое их количество. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом.

Этот метод осаждения (седиментации) применяют для яиц трематод. При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Это методы всплывания (флотации). Они наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.

Метод Фюллеборна основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18-1,22. Раствор хранят в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы.

Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.

Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность к недостаткам — необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

Метод Калантарян.

Вместо насыщенного раствора поваренной соли используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают; литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения). Удельный вес раствора около 1,4.

Достоинства метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод, что следует учитывать при исследованиях с целью диагностики указанных гельминтозов. Высокая стоимость нитрата натрия ограничивает применение данного метода.

Метод Красильникова.

Под действием поверхностно-активных веществ, входящих а состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражнений и концентрируются в осадке.

Предварительно готовят 1% раствор стирального порошка «Лотос». Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100°С в течение 1-2 часов, затем 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии «Лотоса» можно использовать и другие стиральные порошки, но каждого из них нужно брать столько, сколько растворится без образования осадка в 1 л водопроводной воды.

В стеклянный сосуд, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и хорошо перемешивают.

Соотношение испражнений и раствора должно быть примерно 1: 20. Испражнения должны находиться в растворе не менее суток. За это время на дне образуется осадок из 2-3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато-серые хлопья.

Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2-3 капли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Метод Красильникова позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями.

Метод Горячева.

Метод Горячева (метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия.

Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра.

Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

Метод липкой ленты.

Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют.

Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.

Диагностика тканевых гельминтозов.

Для диагностики тканевых гельминтозов (трихинеллез, цистицеркоз и другие) применяются иммунологичекие методы исследования: реакция кольцепреципитапии, связывания комплемента, флюоресцирующих антител, преципитации в агаре и другие, с помощью которых обнаруживаются в сыворотке крови больных соответствующие антитела. Для диагностики трихинеллеза и филяриатозов применяются специальные методы исследований.

Метод биопсии мышц.

Метод биопсии мышц для диагностики трихинеллеза. Исследуют мышцы больного и остатки мяса животных, послуживших причиной заражения человека. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях.

Мышцу измельчают ножницами и помещают между двумя толстыми стеклами (компрессорий) слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах.

Метод переваривания мышц.

Метод переваривания мышц для диагностики трихинеллеза более эффективным. Мелко нарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37°С на 12-16 часов.

Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц с 15-20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и микроскопируют его. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл.

Метод мазка крови и толстой капли.

Данный метод применяется для диагностики фиряриатозов. Большинство видов микрофилярий локализованы в крови, поэтому для их обнаружения применяют исследование крови — мазок или толстую каплю.

Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают ее по стеклу.

Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают ее до получения пятна, диаметром около 1,5 см.

После высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому-Гимза. Михрофиллярии выявляются в виде тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.

Таблица 1

ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ

Название гельминта

Отличительные признаки яиц

1

2

3

1

Фасциола

Трематоды

Размеры около 153×80 мкм. Форма яйцевидная, правильная. Оболочка желтовато-коричневая, гладкая. На верхнем полюсе имеется крышечка. Это самое крупное яйцо гельминтов человека.

2

Описторх

Размеры 26-30×10-15 мкм. Яйцо овальной формы, несколько расширенное у нижнего полюса. На верхнем полюсе имеется крышечка. Оболочка желтого цвета.

3

Парагоним

Размеры 80-118×48-60 мкм. Форма овальная. На верхнем полюсе хорошо выражена крышечка. Оболочка золотисто-коричневая, толстая, гладкая.

4

Шистосома

урогенитальная

Размеры 120-190×50-73 мкм. Форма веретенообразная, без крышечки. Острый шип на одном полюсе расположен вдоль продольной оси яйца. Оболочка тонкая, прозрачная.

5

Шистосома Менсона

Размеры 112-169×60-70 мкм. Форма овально-вытянутая. Острый крупный шип расположен на боковой поверхности яйца, слегка загнут. Оболочка толстая, желтая.

6

Шистосома японская

Размеры 75-90×53-74 мкм. Форма овальная. На боковой поверхности ближе к одному из полюсов расположен небольшой тупой шип. Оболочка бледно-желтая.

7

Тенииды (свиной и бычий цепни)

Цестоды

Размеры 30-40×20-30 мкм. Форма округлая, реже слегка овальная. Оболочка толстая, двухконтурная, поперечно-исчерченная, прозрачная. Внутри расположена онкосфера.

8

Карликовый цепень

Размеры 40×50 мкм. Форма округлая или овальная. Оболочка двойная, прозрачная. Между оболочками имеются извивающиеся нити. Внутри различима лимонообразная онкосфера.

9

Лентец широкий

Размеры 68-71×40-45 мкм. Форма широкоовальная. Оболочка серого или желтоватого цвета, гладкая. На одном полюсе имеется крышечка, на другом — бугорок.

,0

Аскарида

Нематоды

а) Оплодотворенные яйца. Размеры 50-70×40-50 мкм. Форма овальная, реже округлая. Оболочка толстая, многослойная, бугристая, темно-желтая. Внутри находится зародышевая клетка округлой формы. Между ней и полюсами имеется свободное пространство.

б) Неоплодотворенные яйца. Размеры 50-80×40-50 мкм.

Форма близкая к овальной. Оболочка толстая, многослойная, мелкобугристая с отдельными выступающими более крупными буграми темно-желтая. От полюса до полюса яйцо заполнено желточными клетками.

11

Власоглав

Размеры 50-55×23-32 мкм. Форма лимонообразная (боченкообразная). Оболочка толстая, гладкая, желто-коричневая. На полюсах имеются пробкообразные структуры.

12

Острица

Размеры 50-60×26-30 мкм. Форма овально-вытянутая, асимметричная (одна сторона выпуклая другая более плоская). Оболочка тонкая, гладкая, прозрачная, бесцветная.

13

Анкилосто-миды

Размеры 54-70×36-40 мкм. Форма овальная с притуплёнными полюсами. Оболочка тонкая, прозрачная, бесцветная.

Литература

Петровский А.В. Паразитология, Мн.: Светач, 2007 г. 354 с.

Аскерко А.Ч. Основы паразитологии Мн.: БГМУ, 2008 г. 140 с.

Селявка А.А. Общая паразитология Мн.: Знание, 2007 г. 250 с.

referatwork.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*