Метод ифа что это такое


ИФА — современный лабораторный анализ, который помогает выявить специфические антитела в крови к определенным заболеваниям. Метод отличается высокой специфичностью и чувствительностью. Из следующей статьи вы узнаете особенности проведения ИФА, а также о том, как можно расшифровать результат данного анализа.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ проводят когда возникают сложности с постановкой диагноза, если у больного есть наследственная предрасположенность к некоторым заболеваниям, для того чтобы оценить эффективность лечения. Анализ выявляет характерные для определенных возбудителей антигены и антитела к ним. В основе иммуноферментного анализа крови лежит реакция взаимодействия антигена со специфичным антителом, в результате которой образуется комплекс, имеющий в своем составе специальную метку, изменяющую окраску изучаемого образца под действием реагента.

Интенсивность окрашивания дает возможность судить о наличии антител или антигенов, характерных для определенной инфекции, а уже с помощью аппаратуры определяют их количество. Антигенами называют чужеродные вещества, которые вызывают иммунную защитную реакцию в организме – вырабатываются специфические белки (иммуноглобулины).


Для каждого возбудителя есть свой набор антигенов, и реакция на них иммунитета так же специфична. Основным материалом для анализа является кровь из вены.

Проводят анализ для диагностирования вирусных заболеваний: герпеса, гепатита, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барра и т.д, инфекций, которые передаются половым путем: гонореи, уреаплазмы, хламидоза, микоплазмы, трихомонады, сифилиса, для определения гормонального фона, диагностики раковых заболеваний и иммунодефицита, выявления и лечения аллергий. Для проведения анализа кроме крови можно брать также спинномозговую жидкость, околоплодные воды, содержимое стекловидного тела.

Анализ предполагает использование группы ЭЛИ-тестов:

  • ЭЛИ-В-тест, позволяющий сделать заключение о состоянии иммунной системы;
  • ЭЛИ-Диа-тест, определяющий состояние эндокринной системы. С его помощью диагностируют диабет первого и второго типов;
  • ЭЛИ-Н-Комплекс-12, информирующий о состоянии периферической и центральной нервной систем;
  • ЭЛИ-Анкор-тест-12, анализ, оценивающий состояние сердца и сосудов, дающее оценку риска развития инсульта, инфаркта;
  • ЭЛИ-Висцеро-16 делают для оценки общего состояния  пациента. Этот тест предусматривает диагностику по 16 показателям: кишечник, нервная система, миокард, почки, иммунная система, печень, желудок и т.д.;
  • ЭЛИ-П-комплекс-12 делают для оценки репродуктивной способности организма;
  • ЭЛИ-ЖКТ-12 – анализ, оценивающий состояние ЖКТ и дающий возможность предусмотреть риск развития патологий;
  • ЭЛИ-ХГЧ- АФС тест, выявляет нарушения репродуктивного здоровья.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей). Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом.

Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»).


Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета. Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM).

Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса. Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению.

На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью. Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие.

В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой). Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.


Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение. Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена).

Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс. Это интересно Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.

Различные классы антител IgG, IgM, IgA


Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций – это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов – госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.


Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Антитела IgM

Их концентрация повышается вскоре после заболевания. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения. Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике гепатита А и детских инфекций (краснуха, коклюш, ветрянка), легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG — это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов — хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.


Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита.

Антитела IgA

В сыворотке появляются через 10-14 дней после начала заболевания, и вначале их даже можно обнаружить в семенной и вагинальной жидкостях. Уровень антител IgA обычно снижается к 2-4 месяцу после инфицирования в случае успешного лечения. При повторном инфицировании уровень антител IgA вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это — признак хронической формы инфекции.

Преимущества метода


Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни.

Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни. Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода


К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз. В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа: Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:

  • IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
  • IgG к ВИЧ; Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
  • Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр; Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
  • Ig M и IgG к токсоплазмозу;
  • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
  • IgG к паразитарным заболеваниям;
  • Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
  • IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов. Сроки готовности результатов ИФА При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Расшифровка иммуноферментного анализа

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Анализируемые показатели:

  • IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
  • IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции. IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
  • IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце. Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах.

Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

В заключение

Иногда, обнаружив в результатах анализа антитела IgG, например, токсоплазмоза или герпеса, пациенты приходят в панику, не посмотрев на то, что антитела IgM, которые показывают наличие текущей инфекции, могут отсутствовать вовсе. В этом случае анализ говорит о перенесенной ранее инфекции, к которой выработался иммунитет.

В любом случае,  интерпретацию результатов анализа лучше доверить врачу, и с ним же в случае необходимости определиться с тактикой лечения.

Источники:

  • https://www.kp.ru/guide/immunofermentnyi-analiz.html
  • http://www.neboleem.net/immunofermentnyj-analiz.php
  • https://lab4u.ru/articles/znachenie-analizov-na-antitela-igg-igm-iga-v-diagnostike-infektsiy/

neparazit.ru

Реакция организма на патогенную флору

Для того чтобы понять, как, благодаря иммуноферментному анализу, лаборанты диагностируют различные заболевания, необходимо разобраться в физиологическом процессе, который происходит в организме во время заражения инфекциями. Когда патогенный микроорганизм попадает в кровоток, иммунная система человека демонстрирует защитную реакцию в виде выделения определенных веществ – антител. Они связываются с клеткой и анализируют, является ли она частью организма или внедрилась извне. Если иммунная система определила, что клетка чужеродная, то количество антител начинает увеличиваться с целью борьбы с патогенным микроорганизмом.

Антитела бывают разных видов, имеют свои особенности. Одни вещества появляются непосредственно в период инфицирования, другие остаются в течение всей жизни в организме человека и именно благодаря им вырабатывается стойкий иммунитет к конкретному заболеванию. Рзделяют белковые структуры на такие виды: A, D, E, M, G. В медицине антитела называют иммуноглобулинами. Поэтому принято обозначать показатели этих веществ латинскими буквами Ig.

Метод ифа что это такое«>

Иммуноферментный анализ (ИФА) основан именно на данных медицинских знаний. С помощью специальных антигенов в лабораторных условиях можно определить наличие или отсутствие тех или иных антител в биологическом материале. По результатам такого анализа врач может поставить диагноз, а также определить не только наличие патологии, но и давность ее происхождения, выявить уровень опасности для пациента. При иммуноферментном анализе чаще других исследуют наличие антител групп M и G.

Что представляет собой ИФА?

На самом деле иммуноферментный анализ не является инновацией современного общества. Его изобрели еще в 80-х годах. Но для проведения таких исследований требовалась громоздкая дорогостоящая аппаратура. Поэтому использовали такой метод только в специально оснащенных научных лабораториях: его применяли для типирования клеток и тканей. А вот широкого распространения в диагностической медицине он тогда не получил, использовать его было технически сложно и крайне затратно. Лишь с развитием техники и изобретением биополимерных материалов ИФА усовершенствовали. После чего метод стал популяризироваться и завоевывать доверие в медицинских кругах.

Как уже было сказано выше, данный метод подразумевает обнаружение в биоматериале — крови, околоплодных водах, стекловидном теле или спинномозговой жидкости — определенных групп иммуноглобулинов.

Различают исследования без нанесения антигена на поверхность и твердофазный иммуноферментный анализ, который предполагает проведение реакции в специальных лунках. Последний метод имеет большую чувствительность и надежность, поэтому именно таким образом проводят анализ в медицинских лабораториях для обнаружения заболеваний человека.

Фазы иммуноферментного анализа

В зависимости от предполагаемого заболевания, из набора для иммуноферментного анализа используют необходимый антиген, который во время химической реакции при наличии инфекции свяжется с патогенной флорой. Этот процесс называется проведением иммунной реакции.

Затем для того, чтобы визуально определить результат исследования, проводят ферментативную фазу ИФА. Она предполагает окрашивание материала с помощью специальных реагентов. В данном исследовании применяют такие ферменты, как щелочная фосфатаза, пероксидаза и авидин. В зависимости от получившегося цвета в процессе проведения химических реакций и определяют результат иммуноферментного анализа.

Что такое колориметрия?

Анализ ферментативной фазы диагностики проводится с помощью метода, который имеет название «колориметрия». Дело в том, что не только цвет материала дает информацию об инфекции, но и получившаяся в результате химических реакций плотность окраса. Именно этот показатель определяет концентрацию патогенного микроорганизма. Если по старинке используют ручной метод диагностики, то для определения указанных показателей выстраивают специальный калибровочный график.

В современных лабораториях сегодня редко применяют ручной метод. Для проведения анализа ИФА используют специальный аппарат – колориметр, в котором вручную задаются лишь параметры исследования, а затем всю работу, включая построение графика, прибор проводит автоматически.

Метод ифа что это такое«>

Методы ИФА

Различают прямой и непрямой методы иммуноферментного анализа. Первый вид занимает меньше времени, так как имеет лишь 3 стадии выполнения. Сперва к антигенам исследуемого материала, помещенным в специальные лунки, добавляют специфические антитела. Затем удаляют избыточное их количество и проводят ферментативную фазу анализа, получая таким образом результат.

Непрямой метод применяется намного чаще, так как имеет более высокую чувствительность по сравнению с прямым способом диагностики. При его проведении используется двойное исследование. А именно — сначала антиген связывают с немеченым антителом, а затем с меченым. Такой процесс занимает больше времени, но и результат является наиболее точным.

Наборы реагентов

Наборы для иммуноферментного анализа выпускают разные производители, в самых разных комплектациях. В России признанной является компания «Союз медико-биологический». Данный производитель выпускает наборы реагентов для исследования методом ИФА практически всех распространенных в наших широтах инфекций, поддающихся анализу таким способом. Кроме непосредственно самих реагентов в комплекты входят дополнительные материалы, что обеспечивает безопасность, удобство и быстроту выполнения анализа. Кроме того, химические субстанции окрашены в разные цвета, что снижает вероятность ошибки в выборе реагента лаборантом.

Метод ифа что это такое«>

Отличаются химико-биологические наборы относительной доступностью, что прямо влияет на распространение и доступность иммуноферментного анализа для населения.

Преимущества метода диагностики

Несомненно, иммуноферментный анализ имеет ряд преимуществ по сравнению с другими диагностическими методиками:

  1. С его помощью можно определить даже незначительное наличие патогенных организмов, что говорит о высокой чувствительности теста.
  2. Возможность обнаружения заболевания на самых ранних стадиях, что значительно повышает шанс на благополучное излечение.
  3. Простота и удобство взятия биологического материала. Такой анализ проводят как в частных лабораториях, так и в государственных. При необходимости материал может взять медсестра у пациента дома.
  4. Для анализа требуется совсем незначительный объем биоматериала.
  5. Быстрое получение результата. Современное медицинское оборудование позволяет выполнить анализ в течение суток.
  6. Возможность обнаружения скрытых бессимптомных форм инфекции.
  7. Доступность исследования.
  8. При необходимости возможно проведение массовых обследований данным методом.
  9. Существует возможность отслеживания протекания заболевания и эффективности назначенного лечения, так как можно проводить анализ методом ИФА многократно абсолютно безопасно для пациента.
  10. Автоматизация этапов проведения анализа, что исключает человеческий фактор и повышает достоверность результатов.
  11. Реагенты для проведения ИФА хранятся достаточно долго – около года.
  12. Проведение анализа возможно при колебаниях температуры окружающей среды.

Иммуноглобулины группы M

Метод ифа что это такое«>

Антитела группы М вырабатываются иммунной системой сразу после обнаружения чужеродного антигена. Следовательно, если иммуноферментный анализ завершился обнаружением таких веществ в биоматериале, то это свидетельствует об острой стадии протекания заболевания, первичном инфицировании. Иммуноглобулины группы М могут находиться в организме до месяца в зависимости от вида заражения. Затем их количество уменьшается до полного исчезновения.

Иммуноглобулины группы G

На смену иммуноглобулинам группы М появляются белковые структуры вида G. Эти вещества вырабатывают стойкий, в большинстве случаев пожизненный иммунитет к заболеванию. Определение белковой структуры IgG в исследуемом материале указывает на то, что организм ранее встречался с возбудителем и имеет защитную реакцию от повторного заражения.

Показания к диагностике

Иммуноферментный анализ крови применяют для определения разных инфекционных заболеваний, гормональных состояний, делают аллергопробы. А именно:

  • определяют уровень гормонов щитовидной железы;
  • показатели репродуктивной гормональной панели;
  • онкомаркеры;
  • обнаруживают возбудителей инфекционных заболеваний, таких как цитомегаловирус, гепатит, токсоплазма, краснуха, корь, туберкулез, хламидия, сифилис, микоплазма, уреплазма, кандида, лямблии и даже ВИЧ;
  • диагностируют аутоиммунные заболевания. В том числе часто используют для исследования гормонов щитовидной железы иммуноферментный анализ: ТТГ, ТГ, Т3 и Т4.

Кроме диагностических целей, метод иммуноферментного анализа применяют в научно-исследовательской медицинской деятельности.

Как проводится забор материала?

В большинстве случаев для анализа рекомендуется забор венозной крови. После обработки и подготовки материала для исследования проводят иммуноферментный анализ сыворотки крови или плазмы.

Особого внимания требует исследование гормональной панели, так как в данном случае крайне важно учитывать особенности забора материала. Например, диагностика большинства гормонов репродуктивной системы женщины требует взятия венозной крови в определенные дни менструального цикла. На ряд других гормонов действуют внешние факторы: сезонность, время суток, психологическое состояние пациента и многое другое. Не учитывая специфические факторы, можно получить ложный результат, что приведет к обострению заболевания или неправильно назначенному лечению.

Метод ифа что это такое«>

В некоторых, чаще осложненных случаях, для анализа могут понадобиться спинномозговая жидкость, стекловидное тело или околоплодные воды беременной женщины. Процедуры по забору этих биологических материалов несут определенный риск, имеют противопоказания и восстановительный период. Поэтому следует проводить только по показаниям врача и под его профессиональным наблюдением такой иммуноферментный анализ. Расшифровка в таком случае требует специальных медицинских знаний и может занять некоторое время.

Подготовка к анализу

Иммуноферментный анализ следует проводить, придерживаясь всех рекомендаций, так как на результаты исследования влияют внешние факторы. Например, важно сдавать венозную кровь натощак утром (до 11 часов). За 2 недели до предполагаемого забора материала нужно прекратить прием каких-либо лекарственных препаратов, особенно гормональных. Несколько дней перед исследованием следует воздержаться от употребления алкоголя и жирной пищи, а также исключить физическую нагрузку, переживания и стрессы.

Расшифровка результатов

Расшифровка результатов иммуноферментного анализа требует специальных знаний об особенностях белковых структур (антител), о которых было рассказано выше (IgG и IgM). В соответствии с этими данными анализируют показатели исследований. В таблице описаны варианты, которые могут быть получены при проведении анализа:

Иммуноферментный анализ крови: расшифровка
Иммуноглобулины M Иммуноглобулины G Предполагаемая расшифровка
отрицательно отрицательно Организм никогда не сталкивался с данной инфекцией. Нет ни возбудителя, ни антител к нему.
отрицательно положительно Организм выработал стойкий иммунитет к инфекции.
положительно отрицательно Острая форма инфицирования.
положительно положительно Вероятнее всего первичное заражение, но требуются дополнительные диагностические исследования.

Анализируя представленную таблицу, можно сделать вывод, что в большинстве случаев для подтверждения диагноза потребуются дополнительные исследования. Не может дать однозначного ответа один лишь иммуноферментный анализ. Норма в данном случае не имеет четких границ: обнаруженные белки группы G указывают лишь на то, что организм ранее подвергался инфицированию определяемым возбудителем. Но этот же результат может говорить и о наличии острой фазы — важно сопоставить множество факторов и показателей для того, чтобы поставить правильный диагноз.

Факторы риска

ИФА является точным на 90%. Все же существуют факторы риска, которые влияют на искажение результата диагностики: неисправность аппаратуры, неправильный забор материала, его хранение и транспортировка, неучет иных внешних факторов.

Метод ифа что это такое«>

Не рекомендуется проводить диагностику после переливания крови, гемолиза, хирургических вмешательств, взятия биопсии или пункции биологического материала — это также может повлиять на результаты показателей.

Стоимость анализа

Стоимость диагностического исследования имеет большой диапазон и зависит от вида анализа и определяемого антигена, так как исходя из этих факторов рассчитывается стоимость реагентных наборов и определяется сложность проведения анализа. Но в большинстве случае является доступным многим пациентам иммуноферментный анализ. Цена его составляет от 300 р. до 2000 р.

ИФА – доступный, быстрый и высокоэффективный метод диагностики большого перечня заболеваний. Но расшифровкой результатов и постановкой диагноза имеет право заниматься только квалифицированный медицинский работник.

www.syl.ru

Основы метода иммуноферментного анализа

Существует несколько видов ИФА, среди них прямой, непрямой, конкурентный и метод блокирования. Хотя на практике, лаборанты чаще всего используют твердофазный гетерогенный иммунный анализ, который называется ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Принцип проведения иммуноферментного анализа проявляется в реакции антитела и антигена, при которой образовывается иммунный комплекс – антиген-антитело. Такая реакция приводит к тому, что ферментная активность меток на поверхности антител изменяется.

Чтобы разобраться в этом, рассмотрим этот процесс поэтапно.

Первый этап. На этом этапе лаборант, проводящий исследование, размещает на поверхность лунок планшета очищенный антиген инфекционного возбудителя. Затем, к возбудителю добавляют сыворотку крови больного, что провоцирует специфическую реакцию между антителом в крови и антигеном. Это полученное соединение и участвует в следующем этапе эксперимента.

Второй этап. На втором этапе исследования происходит образование иммунных комплексов, которые являются реакцией между антигеном, полученным на первом этапе, и конъюгатом, то есть иммуноглобулином, помеченным ферментом пероксидазы. При этом добавляется специфический хромоген. В результате реакции получается окрашенное соединение в лунке. Интенсивность цвета при этом зависит от количества иммуноглобулинов, содержащихся в крови пациента.

Третий этап. На третьем этапе лаборанты обычно занимаются оценкой результатов исследования. Для этого проводится фотометрирование с использованием спектрофотометра, сравнение плотности биологического материала с плотностью проб, также, проводится математический подсчет результатов. Уровень иммуноглобулинов в крови зависит от плотности лунки планшета.
В практике чаще всего применяют 96 луночные планшеты.

Когда происходит измерение оптической плотности (сокращенно ИП) крови, то проводят подсчет антител в одной единице объема. После чего полученный результат сравнивают с контрольным материалом.
Важно помнить о том, что для каждого метода исследования устанавливаются свои показатели, с помощью которых учитываются референтные значения теста. Это показатели патологий и норм. Поэтому, нужно помнить об этом в каждом конкретном случае. Нельзя проводить интерпретацию результатов одного исследования в иное. Также, нельзя и сравнить результаты отдельно взятых лабораторий.

Заболевания выявляющиеся ИФА диагностикой

С помощью иммуноферментного анализа, можно выявить наличие в организме таких заболеваний:

1) Инфекционные болезни

  • вирус иммунодефицита человека,
  • вирусные гепатиты А, В, С, D, E и другие,
  • цитомегаловирусные инфекции,
  • инфекции герпеса первого и второго типа,
  • токсоплазмоз;
  • инфекцию краснухи,
  • мононклеоз, инфекция Эпштейн-Барра,
  • инфекцию кори,
  • бруцеллез,
  • псевдотуберкулез,
  • салмонеллез,
  • дизентерия или шигеллез,
  • аспергиллез,
  • энцефалит,
  • паразитозы, например, лямбиоз, трихинеллез, токсокароз, описторхоз и некоторые другие,
  • инфекции, передающиеся половым путем: сифилис, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз,
  • хеликобактерная инфекция.

2) Показатели состояния человеческого иммунитета и маркеры аутоиммунных болезней.
3) Онкологические заболевания (хронический гонадотропин, простатспецифический антиген, альвеомуцин, фактор некроза опухоли, раково-эмбриональный антиген и другие).
4) Эндокринные заболевания.
5) Нарушения работы репродуктивной системы.

В список включены не все заболевания, которые могут быть диагностированы с помощью ИФА, этот перечень можно продолжать.

Исследования

Забор материала для исследования методом иммуноферментного анализа.

Для исследований методом ИФА у пациентов могут быть взяты спинномозговое вещество, жидкость стекловидного тела, околоплодные воды, слизь, выделенная из цервикального канала или уретры, а также мазки. Но самым распространенным образцом для исследований является все же кровь пациента.

Забор образцов крови проводится утором, натощак. При этом, нельзя принимать пищу или какие-либо медицинские препараты. Что же касается разного рода терапий, которые включают антибактериальное лечение, лечение от вирусов, паразитов и другие, то их необходимо прекратить не менее, чем за две недели до сдачи анализа.

Результаты иммуноферментного анализа обычно изготавливаются в течение суток. Задержек происходить не должно, хотя при больших скоплениях сывороток, лаборанты могут просто не успеть сделать анализ вовремя.

Результаты исследований методом иммуноферментного анализа

Оценивая результаты проведенных исследований на выявление каких-либо инфекций, особое значение имеет количество иммуноглобулинов, обнаруженных в крови, а также, их вид. От этих показателей зависит присутствие в организме инфекции или же ее отсутствие. Также, сравнив количественные и качественные показатели, лаборант может определить предполагаемую стадию развития болезни, а также отличить острую форму заболевания от хронической формы. Оценивают также и наличие в организме человека активного вируса, что проявляется при обостренной хронической или острой форме заболевания.
Приблизительное время, через которое происходит появление в крови иммуноглобулинов Ig.

Дело в том, что IgМ являются самыми быстро появляющимися антителами. Обнаружение их происходит уже через 1 – 3 недели после процесса инфицирования организма, это является признаком острой фазы заражения вирусом человека.

Также, подобные антитела можно обнаружить в крови пациента при обострении протекания хронической болезни. Количество антител IgМ сохраняется около 3 месяцев с момента их образования, потом они постепенно начинают исчезать. Хотя случаются и исключения. Например, некоторые пациенты после окончательного выздоровления сохраняют количество антител в своей крови. Так, циркуляция иммуноглобулинов проходит через несколько лет после заражения.

У таких пациентов необходимо проверять положительные показатели на присутствие IgМ антител, поскольку возможны ситуации, когда система тестирования допускает ошибку и выдает ложно положительный результат. Такие ситуации очень часто случаются с беременными женщинами.

Что же касается появления антител IgA, то они способны образоваться через 2 или 4 недели после того, как организм подвергся действию инфекции. Но обнаружить антитела можно только через месяц. Именно тогда количество их достигает оптимального для выявления числа.

Антитела IgA вырабатываются клетками лимфоузлов, селезенки, а также слизистых оболочек. Подобные иммуноглобулины способны концентрироваться на поверхностях слизистых оболочек органов, где и выполняют свою защитную функцию, участвуя в местном иммунитете человека.

Появление антител IgG прослеживается тестирующими системами уже на 4 неделе прогрессирования инфекционного процесса в организме. Титр таких иммуноглобулинов постепенно может увеличиваться в течение 2 месяцев. После выздоровления небольшой их титр сохраняется в организме и поддерживает иммунитет. Такие болезни как хламидиоз, трихомониаз и микоплазмоз характеризируются невысоким уровнем антител IgG в крови, что объясняется отсутствием стойкого иммунитета к таким инфекциям.

Классы

Варианты выявления в крови человека иммуноглобулинов разных классов.

  • Выявление антител IgM, которое проводится изолированно, свидетельствует о первичном инфицировании человека.
  • Обнаружение в сыворотке крови одновременно антител класса IgM и IgG происходит также при первичном инфицировании, произошедшем в последние 2-3 месяца. Или же такое сочетание может быть признаком обострения хронического заболевания.
  • Таким образом, такие результаты при беременности не всегда говорят о первичном заражении.
  • Обнаружение изолированно антител класса IgG может быть признаком иммунитета к данной инфекции, хотя также это может указывать и на хроническую болезнь. При наличии хронической формы заболевания большую роль играет количество антител и их динамика. Такие исследования проводят с интервалом примерно в 2 недели.
  • Когда в крови присутствуют сразу антитела IgA и IgM, то это может говорить о первичном инфицировании. Обнаружение IgA изолированно тоже является последствием первичного поражение инфекцией организма.

При обнаружении антител IgA вместе с антителами IgG означает активацию хронической формы инфекции. Иммуноглобулины появляются в крови через 2 недели после обострения болезни.
Авидность антител является показателем прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это дополнительный этап в диагностике методом ИФА.

Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности. А также, можно оценить все риски внутриутробного инфицирования ребенка.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении. Высокая авидность антител свидетельствует о хронической форме болезни, либо же является признаком стойкого иммунитета.

Особенности появления антител в крови грудных детей

Если у детей в возрасте до года или до 1,5 лет в крови обнаружены материнские IgG, то это значит, что антитела проникли в организм ребенка через плаценту во время вынашивания плода. Этот признак не может свидетельствовать об инфицировании малыша, а является передавшемся от матери иммунитетом к инфекции.

Но, если в маленьком организме обнаружено иммуноглобулины класса IgM, которые из-за своего веса не могут проникнуть через плаценту к малышу, то это является признаком инфицирования. Заражение могло произойти уже после рождения или же в период внутриутробного развития.

Количественный метод иммуноферментного анализа.

Результат диагностики заболеваний методом ИФА представлен в определенных единицах измерения:

  1. ОП – оптическая плотность образца – это уровень концентрации антител в одной единице объема. Чем выше этот показатель, тем больше находится иммуноглобулинов в крови.
  2. Некоторые результаты ИФА подразумевают наличие такой единицы как коэффициент позитивности – КП. Это тоже обозначение плотности образца.
  3. Единицы концентрации иммуноглобулинов выражены в нанограммах, миллилитрах или же в нг/мл.
  4. Титры сывороток крови выражены так: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и тому подобное.
  5. Титры, при которых происходит диагностирование заболевания для разных инфекций разные.
  6. В результатах исследования присутствуют такие символы : «-», «+»,«?» (+, ++, +++, ++++).
  7. Качественная же оценка подразумевает наличие только одного пункта из двух: положительно либо отрицательно.

Правильность интерпретации результатов данного исследования зависит от квалификации врача, поскольку кроме специалиста никто не имеет права назначать лечение.

Специалисты оценивают количество антител в крови, их вид и концентрацию.

Также, необходимо помнить о том, что нельзя сравнивать результаты разных методов исследования, либо же результаты тестов, полученные в разных лабораториях. Поскольку для любого метода диагностики существуют свои показатели и единицы измерения.

Сравнивание результатов допустимое только в пределах одной и той же лаборатории.

Видео метода иммуноферментного анализа ИФА

simptomlecheniye.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*